PCR實(shí)驗(yàn)室 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)

PCR聚合酶鏈反應(yīng)，是一項(xiàng)在短時(shí)間內(nèi)體外大量擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù) ,  它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)所，為PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。

PCR實(shí)驗(yàn)室或稱為PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，就是進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)所 ,  廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域 。例如艾滋病、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測(cè)和診斷、DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒定及法醫(yī)物證、動(dòng)植物檢疫、動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè)、動(dòng)物飼料、化妝品、食品檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。

PCR實(shí)驗(yàn)室主要由四間相鄰的實(shí)驗(yàn)室組成，包括試劑準(zhǔn)備區(qū) 、標(biāo)本制備區(qū)、基因擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)。其四區(qū)的工作內(nèi)容如下：

PART.1

試劑準(zhǔn)備區(qū)

該區(qū)域主要完成試劑和主反應(yīng)混合液的儲(chǔ)存、配制和封裝工作。所有運(yùn)送到該區(qū)域的試劑和材料不應(yīng)經(jīng)過其他區(qū)域 ,  試劑和原材料應(yīng)在本區(qū)內(nèi)儲(chǔ)存和制備。本區(qū)域的氣壓應(yīng)相對(duì)外界保持正壓。

由于該區(qū)域有多種試劑，所以 “安全” 應(yīng)是平面設(shè)計(jì)首要考慮因素。平面設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)保持通風(fēng)流暢、逃生暢通。首先實(shí)驗(yàn)臺(tái)布置在房間的兩側(cè)，中間的過道全部通向走廊，便于疏散。同時(shí)根據(jù)國(guó)際人體工程學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)臺(tái)與實(shí)驗(yàn)臺(tái)通道設(shè)計(jì)為1500mm，中間的通道可滿足兩邊坐人中間過人的要求 。

PART.2

標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域的功能是樣本的保存、核酸提取和貯存 、樣本加入擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA 的合成。樣本應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)并儲(chǔ)存在本區(qū)內(nèi)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。

對(duì)于氣流壓力的控制。由于在本區(qū)內(nèi)加樣操作可能產(chǎn)生氣溶膠，為避免氣溶膠擴(kuò)散出去對(duì)外界造成污染 ,  本區(qū)應(yīng)對(duì)外界保持負(fù)壓。從質(zhì)量控制的角度而言，本區(qū)相對(duì)于擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和基因擴(kuò)增區(qū)以及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染 。

但當(dāng)涉及病原微生物時(shí)，從生物安全的角度看，樣本制備區(qū)應(yīng)符合GB19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用安全》對(duì)BSL-2實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)安全要求 ,  此時(shí)要求本區(qū)相對(duì)于擴(kuò)增區(qū)為負(fù)壓 ,  故涉及病原微生物操作時(shí)，在綜合考慮質(zhì)量控制 、生物安全因素的前提下，整體上標(biāo)本制備區(qū)與擴(kuò)增區(qū)的壓力應(yīng)持平， 即均為負(fù)壓 ,  兩個(gè)相鄰房間之間的負(fù)壓值基本相當(dāng) 。

PART.3

基因擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。此外 ,  反應(yīng)混合液  (來自試劑貯存和制備區(qū))  制備成反應(yīng)混合液和已制備的DNA模板  (來自標(biāo)本制備區(qū))  的加入等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。對(duì)于氣流壓力的控制 ,  相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

PART.4

 產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域的功能是擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。該區(qū)域可能會(huì)用到某些可致使基因突變的有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。對(duì)于氣流壓力的控制 ,  該區(qū)域是PCR實(shí)驗(yàn)的最后一步 ,  壓力應(yīng)為最低 ,  相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。

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